mypols Direct Oral Swab 2xPCR Master Mix

€390,00

不再需要DNA分離
-Direct Oral Swab 2x PCR Master Mix使您可以直接進(jìn)行PCR，而無(wú)需任何先前的DNA提取步驟中的繁瑣步驟。只需直接從唾液或頰拭子樣本中進(jìn)行基因分型或病原體檢測(cè)測(cè)定即可。

Direct Oral Swab 2x PCR Master Mix包含HiDi Taq DNA聚合酶，因此，它在需要高單核苷酸區(qū)分性的所有分析中也很熟練，例如在PCR等位基因特異性擴(kuò)增（ASA）中。HiDi Taq DNA聚合酶可從3'末端匹配的引物有效擴(kuò)增，并區(qū)分錯(cuò)配的引物。

該試劑盒配有優(yōu)化的緩沖液系統(tǒng)和用于唾液樣品的單獨(dú)裂解緩沖液。

應(yīng)用領(lǐng)域：

-直接從唾液樣本中進(jìn)行PCR-直接從唾液樣本中進(jìn)行
病原體檢測(cè)
-基因分型和基因組分析
-通過(guò)等位基因特異性擴(kuò)增（ASA）/等位基因特異性PCR進(jìn)行SNP檢測(cè)-直接從唾液樣本中進(jìn)行
-HLA基因分型
-終點(diǎn)PCR- 
真實(shí)使用基于熒光的水解探針

進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR 當(dāng)添加合適的實(shí)時(shí)染料（例如GreenDye（＃2000）或熒光探針）時(shí)，所有HiDi產(chǎn)品也都適用于實(shí)時(shí)循環(huán)。

Direct Oral Swab 2xPCR Master Mix也可以作為5'-3'核酸酶用于水解型探針（例如TaqMan）。

我們建議設(shè)計(jì)具有較短擴(kuò)增子長(zhǎng)度（約60-200 bp）的引物，以獲得良結(jié)果，但也可以使用更長(zhǎng)的擴(kuò)增子長(zhǎng)度。如果更長(zhǎng)的擴(kuò)增子> 500 bp，可能需要添加額外的氯化鎂（+ 0.5-1.5 mM）。

PCR活性：測(cè)試直接口服拭子2x PCR Master Mix的成功等位基因特異性PCR性能，檢測(cè)唾液樣品中人基因組DNA中的基因組SNP（rs72921001）。隨后在2.5％瓊脂糖凝膠上分析PCR產(chǎn)物。通過(guò)在匹配的引物的右側(cè)擴(kuò)增子長(zhǎng)度為109 bp的溴化乙錠染色中觀察到特定產(chǎn)物。在錯(cuò)配引物的情況下，在40個(gè)循環(huán)后沒(méi)有可見(jiàn)的產(chǎn)物形成。

DNA聚合酶活性：已使用人工DNA模板和DNA引物對(duì)HiDiTaq DNA聚合酶活性進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。

酶濃度已通過(guò)蛋白質(zhì)特異性染色確定。請(qǐng)通過(guò)info@mypols.de查詢有關(guān)特定批次濃度的更多信息。

在標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試反應(yīng)中未檢測(cè)到污染。

漆設(shè)計(jì)實(shí)例

匹配與錯(cuò)配核苷酸位于引物的3'末端，以獲得宜區(qū)分結(jié)果。

示例結(jié)果-無(wú)法說(shuō)明口味

香菜：有些人喜歡食物，有些則討厭。在這里，我們正在檢測(cè)HeLa基因組DNA中的基因組SNP（rs72921001）。據(jù)報(bào)道，該SNP接近許多編碼嗅覺(jué)受體的基因。（參考：Eriksson N. 等人（2012年），“嗅覺(jué)受體基因附近的遺傳變異會(huì)影響香菜的偏好。”）

考慮到僅C等位基因特異性引物被延伸并在特定擴(kuò)增子中產(chǎn)生，我們可以得出不喜歡香菜的遺傳易感性，因?yàn)樵揝NP與檢測(cè)香菜的肥皂味顯著相關(guān)。  

在實(shí)時(shí)染料存在下，從1 ng / µl HeLa gDNA中進(jìn)行等位基因特異性PCR，表明僅擴(kuò)增了C等位基因特異性引物。區(qū)分了A等位基因特異性引物，因此多50個(gè)循環(huán)都不能擴(kuò)增。

隨后在2.5％瓊脂糖凝膠上分析PCR產(chǎn)物。通過(guò)溴化乙錠染色以109 bp的擴(kuò)增子長(zhǎng)度觀察特定的產(chǎn)物。