TR-FRET Bridge-It® L-蛋氨酸 (L-Met) 熒光檢測試劑盒，384 孔格式

應(yīng)用：

• 直接測量樣品中的 L-Met 水平

• 使用 Met 作為底物或 Met 作為產(chǎn)物的酶（即蛋氨酸氨基肽酶）的測定

特征：

• 簡單： 將測試樣品或標(biāo)準(zhǔn)品與檢測溶液混合并孵育。絕對沒有洗滌步驟！
  

• 快速： 孵育 50 分鐘后讀取熒光信號
  

• 敏感: 檢測 L-蛋氨酸的檢測下限為 10 µM
  

• 靈活： 檢測有 FRET 和 TR-FRET 格式，可根據(jù)要求調(diào)整為比色格式。

• 特異性：與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸或 L-Met 衍生物（L-Met 亞砜和 L-Met 砜）無交叉反應(yīng)。

L-蛋氨酸和 TR-FRET Bridge-It® 熒光檢測的背景信息

L-蛋氨酸 (L-Met)
L-蛋氨酸是一種必需氨基酸，必須從食物來源或膳食補充劑中獲取。它是其他硫化合物的前體，包括半胱氨酸、牛磺酸和谷胱甘肽。蛋氨酸與三磷酸腺苷反應(yīng)形成 S-腺苷蛋氨酸 (SAM)，它是體內(nèi)主要的甲基供體，有助于合成許多重要物質(zhì)，包括腎上腺素和膽堿。L-蛋氨酸也是動物飼料的重要補充劑。目前，L-蛋氨酸使用高壓液相色譜 (HPLC) 方法進行定量。HPLC 耗時、昂貴，并且由于需要大量的有機溶劑，因此對環(huán)境不友好。

TR-FRET Bridge-It® L-蛋氨酸熒光 (L-Met) 檢測1,2

真核細胞含有大約 3,000 個序列特異性 DNA 結(jié)合蛋白。這些重要的蛋白質(zhì)在有或沒有特定的小分子共調(diào)節(jié)因子（配體）的情況下起作用，控制基因組 DNA 活性的所有方面，包括基因表達、DNA 復(fù)制和 DNA 修復(fù)。Mediomics 正在應(yīng)用其新型熒光檢測平臺開發(fā)體外檢測，用于快速、靈敏地量化 DNA 結(jié)合蛋白及其小分子配體的活性。

所有序列特異性 DNA 結(jié)合蛋白的共同特性是它們能夠以高親和力和特異性結(jié)合含有核苷酸序列的 DNA 雙鏈體，即蛋白質(zhì)的 DNA 結(jié)合位點。

Mediomics 的新型檢測平臺依賴于這一共同特征。包含給定目標(biāo) DNA 結(jié)合蛋白的序列特異性 DNA 結(jié)合位點的 DNA 雙鏈體被分成兩個 DNA“半位點"雙鏈體，每個雙鏈體都有一個短的單鏈突出端。這些單鏈延伸足夠短，因此在沒有靶蛋白的情況下幾乎不會發(fā)生自發(fā)的重新結(jié)合。然而，當(dāng)靶蛋白存在時，它對全長 DNA 序列的高親和力將驅(qū)動兩個半位點 DNA 雙鏈體的重新結(jié)合。這種重新結(jié)合可以通過將兩個熒光團系統(tǒng) [一個供體 (Eu3+) 和一個受體] 并入兩個 DNA 半位點中的每一個中來靈敏地檢測到。在該測定中，DNA 結(jié)合蛋白充當(dāng)其特定配體 (SAM) 的生物傳感器。配體與 DNA 結(jié)合蛋白結(jié)合，通過構(gòu)象變化激活結(jié)合位點。由于兩個熒光團之間的時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (TR-FRET)，激活的 DNA 結(jié)合蛋白的存在被檢測為受體熒光團的熒光信號增加或供體熒光團的熒光信號減少.

Bridge-It® L-蛋氨酸熒光檢測方法具有非常理想的性能特征，包括高信背景 (S/B) 比、良好的線性動態(tài)范圍和約 10 μM 的檢測限?？倻y定時間為 50 分鐘。

注： 此標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供參考。請生成您自己的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

與 HPLC 程序相比，Bridge-It® L-蛋氨酸熒光檢測方法采用 384 和 96 孔微孔板形式。因此，它非常適合快速、同時測量大量測試樣品中的 L-蛋氨酸水平。此外，這種方法很容易適應(yīng)目前用于藥物發(fā)現(xiàn)研究的高通量篩選平臺。